歐際醫(yī)藥依托擁有實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用許可證的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心進(jìn)行合作，為您提供主要包括模型制備、受試物給藥、標(biāo)本采集、功能指標(biāo)檢測(cè)等技術(shù)服務(wù)。

服務(wù)目錄號(hào)：#OGF-003

服務(wù)項(xiàng)目：輔助改善記憶功能評(píng)價(jià)

服務(wù)內(nèi)容：

1.跳臺(tái)實(shí)驗(yàn)、避暗實(shí)驗(yàn)、穿梭箱實(shí)驗(yàn)（雙向回避實(shí)驗(yàn)）、水迷宮實(shí)驗(yàn)（任選其一）

2.選用雄近交系小鼠，斷乳鼠或成年鼠（18－22g），用于改善老年人記憶的產(chǎn)品必須采用成年鼠，雌雄均可，單一性別，每組10－15 只。

3.實(shí)驗(yàn)設(shè)三個(gè)劑量組和一個(gè)陰性對(duì)照組，以人體推薦量的10 倍為其中的一個(gè)劑量組，另設(shè)二個(gè)劑量組，必要時(shí)設(shè)陽性對(duì)照組。受試樣品給予時(shí)間30 天，必要時(shí)可延長(zhǎng)至45天。

4.結(jié)果判定：跳臺(tái)實(shí)驗(yàn)、避暗實(shí)驗(yàn)、穿梭箱實(shí)驗(yàn)、水迷宮實(shí)驗(yàn)四項(xiàng)實(shí)驗(yàn)中任二項(xiàng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果陽性。且重復(fù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果一致（所重復(fù)的同一項(xiàng)實(shí)驗(yàn)兩次結(jié)果均為陽性），可以判定該受試樣品輔助改善記憶動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果陽性。

客戶提供：受試樣品、陽性對(duì)照品

歐際提交：詳細(xì)研究報(bào)告

服務(wù)周期：3個(gè)月

服務(wù)目錄號(hào)：#OGF-003-1

模型名稱：跳臺(tái)實(shí)驗(yàn)

原理：反應(yīng)箱底鋪有通36v 電的銅柵，動(dòng)物受到電擊，其正常反應(yīng)是跳上箱內(nèi)絕緣的平臺(tái)以避免傷害性刺激。多數(shù)動(dòng)物可能再次或多次跳至銅柵上，受到電擊又迅速跳回平臺(tái)，如此訓(xùn)練5min，并記錄每鼠受到電擊的次數(shù)或叫錯(cuò)誤次數(shù)，以此作為學(xué)習(xí)成績(jī)。24h 或 48h 重作測(cè)驗(yàn)，此即記憶保持測(cè)驗(yàn)。記錄受電擊的動(dòng)物數(shù)、第一次跳下平臺(tái)的潛伏期和3min 內(nèi)的錯(cuò)誤總數(shù)。停止訓(xùn)練 5 天后（也可以在訓(xùn)練后的一周、兩周或其它時(shí)間點(diǎn)）進(jìn)行記憶消退實(shí)驗(yàn)。

受試樣品對(duì)正常小鼠記憶的影響：末次給樣后次日（或一次給樣后1h）開始訓(xùn)練。將動(dòng)物放入反應(yīng)箱內(nèi)（臺(tái)上、臺(tái)下）適應(yīng)環(huán)境 3min，然后將動(dòng)物放置反應(yīng)箱內(nèi)的銅柵上，立即通以36v 的交流電。動(dòng)物受到電擊，其正常反應(yīng)是跳回平臺(tái)（絕緣體），以躲避傷害性刺激。多數(shù)動(dòng)物可能再次或多次跳至銅柵上，受到電擊又迅速跳回平臺(tái)上。訓(xùn)練一次后，將動(dòng)物放在反應(yīng)箱內(nèi)的平臺(tái)上，記錄5min 內(nèi)各鼠跳下平臺(tái)的錯(cuò)誤次數(shù)和第一次跳下平臺(tái)的潛伏期，以此作為學(xué)習(xí)成績(jī)。24 或 48h 后進(jìn)行重測(cè)驗(yàn)，將小鼠放在平臺(tái)上，記錄各鼠第一次跳下平臺(tái)的潛伏期、各鼠 3min 內(nèi)電擊次數(shù)和受電擊的動(dòng)物數(shù)總數(shù)，同時(shí)計(jì)算出現(xiàn)錯(cuò)誤反應(yīng)的動(dòng)物的百分率（受電擊的動(dòng)物數(shù)占該組動(dòng)物總數(shù)的百分率）。停止訓(xùn)練5 天后（包括第 5 天）可以在不同的時(shí)間進(jìn)行一次或多次記憶消退實(shí)驗(yàn)（方法同重測(cè)驗(yàn)）。

受試樣品對(duì)記憶障礙模型小鼠的影響：

造模：記憶獲得障礙模型制造：訓(xùn)練前10min 腹腔注射樟柳堿或東莨菪堿 5mg/kg BW；

記憶鞏固障礙模型制造：訓(xùn)練前10min 腹腔注射環(huán)已酰亞胺 120mg/kg BW；

記憶再現(xiàn)障礙模型制造：重測(cè)驗(yàn)前30min 灌胃 30%的乙醇 10mL/kg BW。

數(shù)據(jù)處理及結(jié)果判定：潛伏期結(jié)果為計(jì)量資料，可用方差分析，但需按方差分析的程序先進(jìn)行方差齊性檢驗(yàn)，方差齊，計(jì)算F值，F(xiàn) 值<F0.05，結(jié)論：各組均數(shù)間差異無顯著性；F 值≥F0.05，P≤0.05，用多個(gè)實(shí)驗(yàn)組和一個(gè)對(duì)照組間均數(shù)的兩兩比較方法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)；對(duì)非正態(tài)或方差不齊的數(shù)據(jù)進(jìn)行適當(dāng)?shù)淖兞哭D(zhuǎn)換，待滿足正態(tài)或方差齊要求后，用轉(zhuǎn)換后的數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)；若變量轉(zhuǎn)換后仍未達(dá)到正態(tài)或方差齊的目的，改用秩和檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。

錯(cuò)誤次數(shù)和3min 內(nèi)跳下平臺(tái)的動(dòng)物數(shù)均為記數(shù)資料，可用c²檢驗(yàn)，四格表總例數(shù)小于40，或總例數(shù)等于或大于40 但出現(xiàn)理論數(shù)等于或小于1時(shí)，應(yīng)改用確切概率法。

若受試樣品組與對(duì)照組比較，潛伏期明顯延長(zhǎng)，錯(cuò)誤次數(shù)或跳下平臺(tái)的動(dòng)物數(shù)明顯少于對(duì)照組，差異有顯著性，以上三項(xiàng)指標(biāo)中，任一項(xiàng)指標(biāo)陽性，均可判定該項(xiàng)實(shí)驗(yàn)陽性。

服務(wù)目錄號(hào)：#OGF-003-2

模型名稱：避暗法實(shí)驗(yàn)

原理：利用小鼠嗜暗的習(xí)性設(shè)計(jì)一個(gè)裝置，一半是暗室，一半是明室，中間有一小洞相連。暗室底部鋪有通電的銅柵，并與一計(jì)時(shí)器相連，計(jì)時(shí)器可自動(dòng)記錄潛伏期的時(shí)間。小鼠進(jìn)入暗室即受到電擊，計(jì)時(shí)自動(dòng)停止。

儀器和試劑：避暗儀：該裝置分明暗兩室。明室大小為12cm×4.5cm，其上方約 20cm 處懸一 40w 鎢燈絲。暗室較大，大小為17cm×4.5cm，兩室之間有一直徑約 3cm 的圓洞。兩室底部均鋪以銅柵。暗室底部中間位置的銅柵可以通電，電擊強(qiáng)度可在一旋鈕上任意選擇。一般采用40v 電壓。暗室與一計(jì)時(shí)器相連，計(jì)時(shí)器可自動(dòng)記錄潛伏期的時(shí)間。

試劑：樟柳堿、東莨菪堿、環(huán)己酰亞胺、乙醇。

受試樣品對(duì)正常小鼠記憶的影響：末次給樣后次日（或一次給樣后1h）開始訓(xùn)練。實(shí)驗(yàn)時(shí)將小鼠面部背向洞口放入明室，同時(shí)啟動(dòng)計(jì)時(shí)器。動(dòng)物穿過洞口進(jìn)入暗室受到電擊，計(jì)時(shí)器自動(dòng)停止，取出小鼠，記錄每鼠從放入明室至進(jìn)入暗室遭電擊所需的時(shí)間，此即潛伏期，訓(xùn)練5min，并記錄 5min 內(nèi)電擊次數(shù)。24h 或 48h 后重作測(cè)驗(yàn)，記錄每只動(dòng)物進(jìn)入暗室的潛伏期和5min 內(nèi)的電擊次數(shù)，并計(jì)算 5min 內(nèi)進(jìn)入暗室（錯(cuò)誤反應(yīng)）的動(dòng)物百分率。停止訓(xùn)練 5 天后可以在不同的時(shí)間進(jìn)行一次或多次記憶消退實(shí)驗(yàn)。

數(shù)據(jù)處理及結(jié)果判定：潛伏期時(shí)間為計(jì)量資料，可用方差分析，但需按方差分析的程序先進(jìn)行方差齊性檢驗(yàn)，方差齊，計(jì)算F值，F(xiàn) 值<F0.05，結(jié)論：各組均數(shù)間差異無顯著性；F 值≥F0.05，P≤0.05，用多個(gè)實(shí)驗(yàn)組和一個(gè)對(duì)照組間均數(shù)的兩兩比較方法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)；對(duì)非正態(tài)或方差不齊的數(shù)據(jù)進(jìn)行適當(dāng)?shù)淖兞哭D(zhuǎn)換，待滿足正態(tài)或方差齊要求后，用轉(zhuǎn)換后的數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)；若變量轉(zhuǎn)換后仍未達(dá)到正態(tài)或方差齊的目的，改用秩和檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。5min 內(nèi)進(jìn)入暗室的次數(shù)和 5min 內(nèi)進(jìn)入暗室的動(dòng)物數(shù)均為計(jì)數(shù)資料，可用c2檢驗(yàn)，四格表總例數(shù)小于 40，或總例數(shù)等于或大于40 但出現(xiàn)理論數(shù)等于或小于 1 時(shí)，應(yīng)改用確切概率法。若受試樣品組小鼠進(jìn)入暗室的潛伏期明顯長(zhǎng)于對(duì)照組，5min 內(nèi)進(jìn)入暗室的錯(cuò)誤次數(shù)或 5min 內(nèi)進(jìn)入暗室的動(dòng)物數(shù)少于對(duì)照組，且差異有顯著性，以上三項(xiàng)指標(biāo)中任一項(xiàng)指標(biāo)陽性，均可判定該項(xiàng)實(shí)驗(yàn)陽性。

服務(wù)目錄號(hào)：#OGF-003-3

模型名稱：穿梭箱實(shí)驗(yàn)（雙向回避實(shí)驗(yàn)）

儀器與試劑：儀器：大鼠穿梭箱。該裝置由實(shí)驗(yàn)箱和自動(dòng)記錄打印裝置組成。實(shí)驗(yàn)箱大小為50cm×16cm×18cm。箱底部格柵為可以通電的不銹鋼棒，箱底中央部有一高1.2cm 擋板，將箱底部分隔成左右兩側(cè)。實(shí)驗(yàn)箱頂部有光源和蜂鳴音控制器，自動(dòng)記錄打印裝置可連續(xù)自動(dòng)記錄動(dòng)物對(duì)電刺激（燈光或/和蜂鳴器）的反應(yīng)和潛伏期，并將結(jié)果打印出來。

試劑：樟柳堿，東莨菪堿，環(huán)已酰亞胺，乙醇

受試樣品對(duì)正常大鼠條件反射建立的影響：末次給樣后次日（或一次給樣后1h）開始訓(xùn)練。將大鼠放入箱內(nèi)任何一側(cè)，20s 后開始呈現(xiàn)燈光或蜂鳴音，持續(xù)20s，后 10s 內(nèi)同時(shí)給以電刺激（100V，0.2mA，50Hz，AC）。大鼠在遭電擊后即逃避，必須跑到對(duì)側(cè)頂端，擋住光電管后才可中斷電擊，此為被動(dòng)回避反應(yīng)，在每次電擊前給予條件刺激，反復(fù)強(qiáng)化后，大鼠在接受條件刺激后即跳向?qū)?cè)并擋住光電管而逃避電擊，此為主動(dòng)回避反應(yīng)，每隔天訓(xùn)練一回，每回50次，連續(xù)訓(xùn)練4－5 回后，動(dòng)物的主動(dòng)回避反應(yīng)率可達(dá) 80－90%以上。根據(jù)打印結(jié)果分析如下指標(biāo)：動(dòng)物反應(yīng)次數(shù)，動(dòng)物主動(dòng)回避時(shí)間，動(dòng)物被動(dòng)回避時(shí)間，動(dòng)物主動(dòng)回避率。停止訓(xùn)練5－50 天內(nèi)，分 2－3 次測(cè)定其記憶消退情況。

數(shù)據(jù)處理及結(jié)果判定：動(dòng)物主動(dòng)回避時(shí)間和被動(dòng)回避時(shí)間為計(jì)量資料，可用方差分析，但需按方差分析的程序先進(jìn)行方差齊性檢驗(yàn)，方差齊，計(jì)算F 值，F(xiàn) 值<F0.05，結(jié)論：各組均數(shù)間差異無顯著性；F 值≥F0.05，P≤0.05，用多個(gè)實(shí)驗(yàn)組和一個(gè)對(duì)照組間均數(shù)的兩兩比較方法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)；對(duì)非正態(tài)或方差不齊的數(shù)據(jù)進(jìn)行適當(dāng)?shù)淖兞哭D(zhuǎn)換，待滿足正態(tài)或方差齊要求后，用轉(zhuǎn)換后的數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)；若變量轉(zhuǎn)換后仍未達(dá)到正態(tài)或方差齊的目的，改用秩和檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。若實(shí)驗(yàn)組主動(dòng)和/或被動(dòng)回避時(shí)間明顯短于對(duì)照組，差異有顯著性，可判定為該指標(biāo)陽性。

服務(wù)目錄號(hào)：#OGF-003-3

模型名稱：水迷宮實(shí)驗(yàn)

原理：動(dòng)物都有一種“探索”和“更替”傾向，當(dāng)離開一個(gè)臂時(shí)，總是跑向“久”未跑過的“新”臂。小鼠不愿在水中，因而尋找能爬出水面的階梯，訓(xùn)練后，小鼠能記住找到階梯的路線。

儀器與試劑：水迷宮自動(dòng)記錄儀。該儀器是由迷宮游泳箱和自動(dòng)記錄儀兩部分組成。迷宮游泳箱由聚乙烯塑料制成，長(zhǎng)100cm、寬 100cm、高 30cm；內(nèi)徑長(zhǎng) 90cm、寬 90cm、高 30cm，泳道寬 12cm，泳道走向固定。見附圖。

受試樣品對(duì)正常小鼠記憶的影響：連續(xù)給樣30 天，末次給樣次日開始訓(xùn)練。訓(xùn)練期間繼續(xù)給樣，每天一次。迷宮泳道水深 9cm，水溫約20℃（≮15℃）。將小鼠訓(xùn)練時(shí)間限定為 2min，在 2min 內(nèi)未到達(dá)終點(diǎn)的小鼠均記為 2min。第一次訓(xùn)練前將小鼠放在梯子附近，使其自動(dòng)爬上3 次。以后每次訓(xùn)練前將小鼠放在梯子附近，背朝樓梯，使其自動(dòng)爬上1 次。實(shí)驗(yàn)分階段進(jìn)行，視動(dòng)物學(xué)習(xí)成績(jī)逐步加長(zhǎng)路程。第一次訓(xùn)練時(shí)用一擋板在 A 處檔死，從A 處開始訓(xùn)練，記錄從 A 點(diǎn)到達(dá)終點(diǎn)的時(shí)間。第二次訓(xùn)練加長(zhǎng)路程，從 B 處開始，此路程約訓(xùn)練 3

次，至動(dòng)物數(shù)80%以上在 2min 內(nèi)達(dá)到終點(diǎn)后再延長(zhǎng)路程，分別記錄各鼠每次從 B 點(diǎn)到達(dá)終點(diǎn)所需的時(shí)間和發(fā)生錯(cuò)誤的次數(shù)（進(jìn)入任何一個(gè)盲端一次均算一次錯(cuò)誤）。末次測(cè)試從起點(diǎn)進(jìn)行，將小鼠放在起點(diǎn)，記錄從起點(diǎn)到達(dá)終點(diǎn)所需的時(shí)間和發(fā)生錯(cuò)誤的次數(shù)。每次訓(xùn)練時(shí)，對(duì)2min 內(nèi)未達(dá)到終點(diǎn)的小鼠，應(yīng)引導(dǎo)其到達(dá)終點(diǎn)，從終點(diǎn)的樓梯上來，達(dá)到訓(xùn)練的目的。每次訓(xùn)練或測(cè)驗(yàn)時(shí)均將頭朝起始點(diǎn)。最后計(jì)算各組動(dòng)物5 次訓(xùn)練和測(cè)試的總錯(cuò)誤次數(shù)，到達(dá)終點(diǎn)的總時(shí)間及2min 內(nèi)到達(dá)終點(diǎn)的總動(dòng)物數(shù)（百分率），停止訓(xùn)練 5 天后可在不同的時(shí)間從起點(diǎn)進(jìn)行消退實(shí)驗(yàn)。

數(shù)據(jù)處理及結(jié)果判定：到達(dá)終點(diǎn)的時(shí)間屬計(jì)量資料，可用方差分析，但需按方差分析的程序先進(jìn)行方差齊性檢驗(yàn)，方差齊，計(jì)算F 值，F(xiàn) 值<F0.05，結(jié)論：各組均數(shù)間差異無顯著性；F 值≥F0.05，P≤0.05，用多個(gè)實(shí)驗(yàn)組和一個(gè)對(duì)照組間均數(shù)的兩兩比較方法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)；對(duì)非正態(tài)或方差不齊的數(shù)據(jù)進(jìn)行適當(dāng)?shù)淖兞哭D(zhuǎn)換，待滿足正態(tài)或方差齊要求后，用轉(zhuǎn)換后的數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)；若變量轉(zhuǎn)換后仍未達(dá)到正態(tài)或方差齊的目的，改用秩和檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。錯(cuò)誤次數(shù)和到達(dá)終點(diǎn)的動(dòng)物數(shù)（百分率）兩指標(biāo)為計(jì)數(shù)資料，可用χ²檢驗(yàn)，四格表總例數(shù)小于40，或總

例數(shù)等于或大于40 但出現(xiàn)理論數(shù)等于或小于 1 時(shí)，應(yīng)改用確切概率法。試驗(yàn)組與對(duì)照組比，試驗(yàn)組到達(dá)終點(diǎn)所用的時(shí)間或到達(dá)終點(diǎn)前的錯(cuò)誤次數(shù)明顯少于對(duì)照組，或2min 內(nèi)到達(dá)終點(diǎn)的動(dòng)物數(shù)明顯多于對(duì)照組，且經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)差異有顯著性。其中任一項(xiàng)指標(biāo)為陽性，可判為該項(xiàng)實(shí)驗(yàn)陽性。